Материалы » Разработка условий оптимизации процесса амплификации ДНК » Постановка ПЦР в микрообъеме с отрицательными контролями

Постановка ПЦР в микрообъеме с отрицательными контролями

ПЦР ставили по протоколам с использованием SYBRgreen и TaqMan. Общий объем ПЦР смеси составлял 1 мкл. Количество внесенной матрицы одинаково – 7 нг. Контролем служили пробы без матрицы. Измерение и регистрацию флуоресцентного сигнала проводили с помощью описанной системы детекции и программы «Qwantа». Результаты измерений представлены в таблице 5.

По данным таблицы видно, что приращение сигнала флуоресценции сопоставимо с измерениями, полученными при проведении ПЦР в капле смеси объемом 1 мкл в среде масла в обоих случаях. А значит амплификация проходит с не меньшей эффективностью чем на моделях с каплями. Сильный разброс значений в случае SYBRgreen лишний раз доказывает, что работа с микрообъемами – это очень сложный процесс, где даже самые минимальные погрешности в работе (погрешности пипеток, чистота преперата и т.д.) становятся критичными и влияют на результат.

Таблица 5.

SYBRgreen

С матрицей

(флуоресценция, у.е.)

Среднее значение (среднее отклонение)

Без матрицы

(флуоресценция, у.е)

Среднее значение (среднее отклонение)

Приращение

(флуоресценция, у.е)

Среднее значение(среднее отклонение)

41

40,8(3)

34

35,4(4)

7

5,4(3,5)

40

31

9

38

36

2

44

39

5

41

37

4

TaqMan

С матрицей

(флуоресценция, у.е)

Среднее значение (среднее отклонение)

Без матрицы

(флуоресценция,у.е)

Среднее значение (среднее отклонение)

Приращение

(флуоресценция,у.е)

Среднее значение(среднее отклонение)

82

89,2(8,5)

57

58,2(1,5)

25

31(19)

99

55

44

91

60

31

89

60

29

85

59

26


Клеточная инженерия у растений
Клеточная инженерия у растений заключается в получении растений из одной клетки, а также в генетических манипуляциях с изолированными клетками, направленными на преобразование их генотипов. Метод получения растений из одной клетки основан на способности тканей растений ряда видов к неорганическому росту на специальных искусственных сре ...

Функции вращения
Преобразование W можно найти путем сравнения функций Паттерсона кристалла неизвестной молекулы P x и модели P m. Критерием соответствия ориентации модели и неизвестной молекулы служит так называемая функция вращения, которая представляет собой интеграл перекрывания функций P x(r ) и P m(Wr ) в элементе объема U и имеет максимумы если си ...

Современное представление о структуре и функции генов
Ген - совокупность сегментов ДНК, которые вместе образуют наследственную единицу, отвечающую за функциональную продуктивность, т.е.за белок или т-РНК, или р-РНК. В сост входит: 1) единица транскрипции, т.е.участок ДНК, кодирующий не зрелую РНК; 2) промотр – длина гена может быть от 190-16000 пар нуклеотид. Ген явл единицей ф-и, т.е.ест ...